光譜儀廠家為您解析在使用X熒光光譜儀分析時的幾大誤區。
1、?熒光光譜的基本原理
(1)分子熒光光譜的產生
a、分子的能級包括:電子能級(10ev)、振動能級(0.1ev)及轉動能級(0.001ev)。
b、電子能級的多樣性? ??
單重態(singlet state):總自旋S=0,兩個電子自旋相反,M=2S+1=1
三重態(triplet state):總自旋S=1,兩個電子自旋方向平行,M=2S+1=3
2、?熒光定量分析方法
由于能產生熒光的物質占被分析物的數量相當有限,且就這少量的熒光物質幾乎在同一波長段產生光致發光,所以熒光法很少用來定性分析。
(1)標準曲線法
用已知量的標準物質經過和試樣相同的處理之后,配成一系列標準溶液,測定這些溶液的熒光強度,以熒光強度為縱坐標,標準溶液的濃度為橫坐標繪制標準曲線。然后在同樣條件下測定試樣溶液的熒光強度,從標準曲線上求出試樣中熒光物質的含量。
(2)比例法
取已知量的純凈熒光物質配一標液,使濃度在線性范圍內,測Fs。同樣條件下測試樣Fx(若空白液的熒光強度調不到0%時,應扣除空白F0)。
3、?分子熒光光譜法的特點
(1)靈敏度高
(2)選擇性強
(3)樣品用量少
(4)信息量豐富
(5)方便、快捷
(6)環保
4.? 躍遷類型的比較
處于激發態的分子返回到基態共有以下幾種途徑:
a、振動馳豫(vibrationalrelexation):
特點:發生在同一個激發態的電子能級上;時間約10-12秒。
b、內部能量轉換(internal conversion):
特點:兩個電子的能級非常靠近以致其振動能級有重疊時內部轉換易發生。10-1~10-13秒可完成。
c、外部能量轉換(external conversion):
特點:發生分子與分子的碰撞時;時間約10-9~10-7秒。
d、體系間跨越(intersystem crossing):
特點:振動能級重迭時,產生體系間跨越的可能大;跨越后,熒光量子減弱,甚至會熒光熄滅。
e、熒光(Fluorescence):
特點:熒光的能量小于所吸收的紫外光的能量,故發射熒光的波長比吸收的紫外光波長更長;時間約為10-9~10-7。
f、磷光(Phosphorescence):
特點:磷光能量比熒光小,波長比熒光長;發射時間長,約為10-4~10秒(原因是分子激發三重態的壽命較長)。
X熒光光譜儀分析曲線
5. 熒光光譜的特點
a、斯托克斯位移(Stocks shift):熒光發射波長總是大于激發光波長。原因:激發態分子由于內部能量轉換和振動馳豫過程而迅速到達S1*電子態的最低振動能級,從而存在著無輻射能量損失。
b、熒光發射光譜的形狀與激發波長無關。原因:熒光發射發生于第一電子激發態的最低能級,與分子激發至那一個電子能級無關(即使分子激發到高于S1*的電子態的更高振動能級,可通過內轉換和振動馳豫等無輻射躍遷的形式釋放能量回到第一電子激發態的最低能級)。
c、熒光光譜與激發光譜呈對稱鏡像關系。
6、?分子熒光光譜的主要應用
(1)在生物領域的應用該領域主要用于臨床測定生物樣品中某些成分的含量,生物技術及免疫技術的分析等,如脫氧核糖和脫氧核糖核酸的含量測定、DNA、抗體、抗原等各方面的研究。在此領域中主要時利用各種熒光探針進行分析檢測,主要分為生物納米熒光探針和生物非納米熒光探針。
(2)在食品領域的應用該領域主要用于食品中礦物質及金屬元素、氨基酸、維生素、菌類污染、添加劑、防腐劑、食品包裝有害物質、農藥殘留等的分析檢測。特別是與HPLC、TLC、FIA等技術的結合可以更好的達到食品中各種物質的檢測效果。
(3)分子熒光光譜在藥物分析中的應用藥物分析領域可以利用熒光分析進行藥物的有效成分鑒定、藥物代謝動力學研究、臨床藥理藥效分析等。藥物熒光分析可以分為三類:直接熒光分析、間接熒光分析和納米熒光分析。
(4)分子熒光光譜在環境分析中的應用該領域主要利用熒光分析檢測環境中的物質的含量,主要是對水體、礦石和土壤進行檢測。